تخلیص و تغلیظ DNA از محلولهای آبی
|
|
|
|
چکیده: (1229 مشاهده) |
این بخش روشهای اصلی برای دستورزی محلولهای تکزنجیرهای یا دوزنجیرهای DNA در طی مراحل تخلیص و تغلیظ را ارایه میکند. این تکنیکها وقتی که پروتئینها یا ملکولهای حلشونده باید از محلولهای آبی برداشته شوند یا وقتی محلولهای DNA برای سهولت در کار نیاز به تغلیظ دارند، قابل استفاده هستند. روش اصلی که از استخراج فنولی و رسوبدادن با اتانول استفاده میکند، برای تخلیص DNA در حجمهای کوچک (4/0<) و در غلظتهایmg/ml 1≥ مناسب است. همانطور که در پروتکل جایگزین 1 آمده، ایزوپروپانول نیز ممکن است برای تهنشینی DNA استفاده شود. سه پروتکل مکمل روشهایی را برای استفاده از بافر فنول (پروتکل 2 را ملاحظه کنید) و استخراج حلالهای آلی باقیمانده با اتر (پروتکل مکمل 3 را مشاهده کنید) ترسیم میکنند. روش دیگر تخلیص اسیدنوکلئیک با استفاده از ستونهایspin با غشای سیلیکایی است که به صورت تجاری در دسترس هستند و در پروتکل 2 آمده است. همچنین میتوان از پروتکلهای جایگزین برای تخلیص RNA استفاده کرد.
دو پروتکل جایگزین پایانی، اصلاحاتی را برای پروتکل اصلی فراهم میکند که برای تغلیظ RNA و استخراج و تهنشینی DNA از حجمهای بالاتر و محلولهای رقیق (پروتکل جایگزین 3) و همچنین برای برداشتن الیگونوکلئوتیدها با وزن مولکولی پایین و تریفسفاتها (پروتکل جایگزین 4) استفاده میشود. |
|
|
|
|
نوع درخواست: ويرايش فارسی |
موضوع مقاله:
انسانی
|
|
|
|